【目的】優(yōu)化大旗瓣鳳仙issr-pcr反應(yīng)體系,為大旗瓣鳳仙遺傳多樣性分析提供技術(shù)參考?！痉椒ā坷谜辉囼炘O(shè)計對大旗瓣鳳仙issr-pcr反應(yīng)體系的5個因素(mg2+、dntp、引物、taqdna聚合酶、模板dna)4水平進(jìn)行優(yōu)化分析,并在此基礎(chǔ)上對pcr反應(yīng)過程中的退火溫度進(jìn)行篩選。【結(jié)果】建立了大旗瓣鳳仙issr-pcr的優(yōu)化反應(yīng)體系,即在25.0μl反應(yīng)體系中含1×pcrbuffer、mg2+1.5mmol/l、dntp0.25mmol/l、引物0.8μmol/l、taqdna聚合酶0.75~1.00u、模板dna100ng。通過該體系可以篩選出6條對大旗瓣鳳仙種群擴增效果較好的引物?！窘Y(jié)論】優(yōu)化的issr-pcr反應(yīng)體系具有較高的穩(wěn)定性,可用于大旗瓣鳳仙及鳳仙屬植物種群的issr遺傳多樣性分析。

對影響三角梅issr-pcr擴增反應(yīng)的各個參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,建立適合三角梅的issr反應(yīng)體系:pcr反應(yīng)體積為20μl,其中10×buffer(含mg2+)2.0μl,dntp250μmol/l,taq酶1.0u,引物0.3μmol/l,模板dna20ng。擴增程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,51.6℃退火1min,72℃延伸2min,34個循環(huán);最后72℃延伸7min。該反應(yīng)體系標(biāo)記點位清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好,適宜三角梅issr分析,為應(yīng)用issr技術(shù)鑒定三角梅種質(zhì)資源、分子標(biāo)記輔助選擇育種及其遺傳多樣性研究奠定了基礎(chǔ)。

利用正交設(shè)計試驗,對影響issr-pcr的mg2+、dntps、引物、taqdna聚合酶和模板dna5個因素進(jìn)行優(yōu)化試驗。結(jié)果表明:25μlissr-pcr反應(yīng)體系中各因素的最佳條件為mg2+2.5mmol/l、dntps0.25mmol/l、引物0.2μmol/l、taqdna聚合酶1.0u,模板dna40ng。通過對狗牙根issr-pcr最佳反應(yīng)體系進(jìn)行梯度退火試驗,得到引物ubc881的最佳退火溫度為50.5℃。該體系在24個狗牙根種質(zhì)中獲得較好的擴增結(jié)果,該優(yōu)化體系為今后利用issr技術(shù)進(jìn)行狗牙根屬種質(zhì)資源的遺傳多樣性分析奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

以西洋杜鵑(rhododendronhybridum)葉片提取的基因組dna為材料,用引物ubc880(序列為ggagaggagaggaga)研究了pcr反應(yīng)體系的主要成分及退火溫度對該種植物issr擴增結(jié)果的影響。確立了可用于西洋杜鵑issr-pcr分析的最適宜的pcr反應(yīng)體系:20μlpcr反應(yīng)體積中,含10ng模板dna,0.25mmol.l-1dntps,2.0mmol.l-1mg2+,1.0utaqdna聚合酶,0.4μmol.l-1引物,并確定引物ubc880的最適退火溫度為54.4℃。pcr擴增程序:94℃預(yù)變性5min,94℃變性45s,54.4℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40個循環(huán)后,72℃延伸7min,4℃保存。應(yīng)用該issr體系對11份西洋杜鵑種質(zhì)進(jìn)行了擴增,證實了該體系的適用性和穩(wěn)定性。

為建立鵝掌楸簡單序列重復(fù)區(qū)間擴增issr的pcr優(yōu)化反應(yīng)體系,以鵝掌楸葉片基因組dna為材料,系統(tǒng)地測試了模板dna、引物、dntps、mg2+濃度、taqdna聚合酶用量及退火溫度對issr-pcr反應(yīng)體系的影響。結(jié)果表明:優(yōu)化的pcr反應(yīng)體系為:20μl總體系中,含30ng模板dna,0.3μmol.l-1隨機引物,0.2mmol.l-1dntps,1.4mmol.l-1mg2+,0.8utaqdna聚合酶;最佳退火溫度為60℃;pcr反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性1min,60℃退火45s,72℃延伸2min;45個循環(huán);72℃再延伸7min。

[目的]建立貫葉連翹的issr-pcr反應(yīng)體系,并對其條件進(jìn)行優(yōu)化。[方法]以貫葉連翹基因組dna為模板,用l16(45)正交試驗設(shè)計系統(tǒng)分析引物濃度、taqdna聚合酶濃度、mg2+濃度、dntp濃度和模板dna濃度5種因素對貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)擴增結(jié)果的影響。[結(jié)果]正交試驗設(shè)計的方法可以用于貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)體系的建立,經(jīng)過優(yōu)化得到貫葉連翹issr-pcr反應(yīng)體系的最佳條件為:20μlissr-pcr反應(yīng)體系中含10×pcrbuffer,mg2+濃度1.2mmol/l,taqdna聚合酶濃度50u/ml,dna濃度20ng/μl,dntp濃度250μmol/l,引物濃度0.75μmol/l。[結(jié)論]試驗建立的貫葉連翹的issr-pcr反應(yīng)體系重復(fù)性好、分辨率高,結(jié)果穩(wěn)定可靠。

比較ctab法和sds法提取叉葉蘇鐵(cycasmicholitzii)的總dna,發(fā)現(xiàn)ctab法是提取叉葉蘇鐵總dna的較好方法;對叉葉蘇鐵issr-pcr反應(yīng)體系中的4個主要因素dntps,taqdna聚合酶,引物及mg2+進(jìn)行最優(yōu)條件篩選;采用單因素法探討dna模板量、退火溫度和循環(huán)次數(shù)的最佳反應(yīng)條件,建立了適合于叉葉蘇鐵的最佳issr-pcr反應(yīng)體系(20μl體系):1×buffer,75ngdna模板,dntps250μmol·l-1,taq酶1.0u,引物0.2μmol·l-1,mg2+2.5mmo·ll-1,反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min,94℃變性1min,52℃退火1min,72℃延伸2min,循環(huán)40次,72℃延伸10min,4℃保存。本研究結(jié)果為蘇鐵綱植物的分子生物學(xué)和分子系統(tǒng)學(xué)研究提供理論參考。

以sds法提取的結(jié)縷草(zoysiaspp.)葉片dna為模板,應(yīng)用正交試驗設(shè)計,從mg2+、dntp、引物和dna聚合酶并通過比較不同濃度的模板dna對pcr擴增的影響,確立結(jié)縷草屬植物issr-pcr反應(yīng)的最佳體系。結(jié)果表明:各因素不同濃度對pcr反應(yīng)結(jié)果有顯著影響,正交設(shè)計可以用于issr反應(yīng)體系建立,該方法建立的結(jié)縷草屬植物issr-pcr優(yōu)化反應(yīng)體系為10xbuffer7、0ng模板dna、mg2+2.0mmol.l-1、dntp150μmol.l-1、primer0.3μmol.l-1、taqdna聚合酶1.0u,總體積20μl;經(jīng)對11份結(jié)縷草屬植物進(jìn)行檢驗,證明該體系穩(wěn)定可靠。該體系的建立可為今后利用issr標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行結(jié)縷草屬遺傳多樣性研究、種質(zhì)資源鑒定和親緣關(guān)系分析等提供依據(jù)。

采用單因子和正交設(shè)計2種方法,對影響廣玉蘭issr-pcr反應(yīng)體系的5個因素(taq酶、mg2+、dntp、引模板dna)進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明:正交設(shè)計采用直觀分析法獲得影響因素最佳反應(yīng)水平與單因子試驗找出影響因素最佳反應(yīng)水平有一定差異,通過綜合比較分析,最終建立了廣玉蘭issr-pcr的最佳反應(yīng)體系:在20μl的反應(yīng)體系中,taqdna聚合酶1.0u、mg2+1.2～1.5mmol/l、dntp1.80mmol/l、引物0.5～0.6μmol/l、30ng模板dna、10×pcrbuffer。同時,通過pcr比較,確定延伸時間為2min,循環(huán)次數(shù)為35個較為合適,確定了引物最佳退火溫度,得到了廣玉蘭issr-pcr反應(yīng)的最佳擴增程序。

采用單因子試驗和正交設(shè)計方法,對影響闊葉十大功勞issr-pcr反應(yīng)體系的引物、taqdna聚合酶、dntps、模板dna及退火溫度5個因素進(jìn)行優(yōu)化,為探討闊葉十大功勞種質(zhì)遺傳多樣性奠定基礎(chǔ).結(jié)果表明:闊葉十大功勞issr-pcr的最佳反應(yīng)體系為:在20μl反應(yīng)體系中,0.5μmol/l引物、0.5utaq酶、150μmol/ldntps和20ng模板dna.在最佳反應(yīng)條件下,從80條引物中篩選出15條擴增穩(wěn)定、多態(tài)性豐富的issr引物,并經(jīng)過9份闊葉十大功勞種質(zhì)檢驗,證明該體系具有擴增條帶清晰、穩(wěn)定、重復(fù)性好等優(yōu)點.綜上所述,本文所建立的issr-pcr反應(yīng)體系可用于闊葉十大功勞的種質(zhì)鑒定及遺傳多樣性分析.

issr標(biāo)記能揭示出種間、種內(nèi)遺傳變異情況,更好地揭示親緣關(guān)系和遺傳多樣性。以大花萱草的5個品種為試材,研究了影響大花萱草issr-pcr擴增效果的各項因素,建立了適合大花萱草issr-pcr的最佳反應(yīng)體系:20μl反應(yīng)體系中,10×buffer2μl,dntp0.2mmol/l,mg2+濃度1.5mmol/l,引物濃度0.5mmol/l,taq酶10.002nkat,dna模板20ng。大花萱草的最佳issr擴增反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性40s,50℃退火45s,72℃延伸1.5min,共40個循環(huán);最后72℃延伸10min。通過該反應(yīng)程序進(jìn)行的大花萱草issr擴增可獲得清晰、穩(wěn)定的條帶。

采用單因子試驗與正交試驗的方法,研究了海南龍血樹(dracaenacambodianapierreexgagnep)issr-pcr反應(yīng)體系中的主要影響因子,篩選出16條有效引物并優(yōu)化了它們的退火溫度,此外還檢測了體系的重復(fù)性。優(yōu)化后的25μl反應(yīng)體系包含:10×pcrbuffer2.5μl,3.0mmol/lmgcl2,300μmol/ldntps,taq聚合酶3.0u,引物0.2μmol/l,dna模板20ng。該反應(yīng)體系可用于海南龍血樹的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的分析。

基于VISSIM的城市交叉口改善優(yōu)化研究

Liss鋼板

主要從遺傳多樣性研究、親緣關(guān)系與分類學(xué)研究和種質(zhì)資源鑒定研究3個方面介紹了issr分子標(biāo)記在園林植物中的應(yīng)用,并探討其存在的問題。

以假儉草葉片dna為模板,采用正交試驗設(shè)計,以mg2+、dntp、引物和taqdna聚合酶4種因素3個水平,對假儉草srap反應(yīng)體系進(jìn)行研究,并比較了不同濃度模板dna對擴增效果的影響,建立了假儉草的srap最佳反應(yīng)體系。結(jié)果表明,假儉草srap-pcr最佳反應(yīng)體系為:2μl10×pcrbuffer、60ng模板dna、mg2+1.50mmol/l、dntp260μmol/l、引物0.25μmol/l、taqdna聚合酶0.5u,總體積為20μl。各因素對擴增反應(yīng)結(jié)果均有不同影響,其中以mg2+濃度影響最大,taqdna聚合酶的影響最小。運用該體系對4份假儉草種源進(jìn)行驗證,證明該體系穩(wěn)定可靠,并從45個srap引物組合中篩選出擴增條帶清晰、多態(tài)性豐富的26個引物組合。這一體系的建立及多態(tài)性引物組合的篩選為今后利用srap標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行假儉草分子遺傳學(xué)研究提供了科學(xué)依據(jù)。

以石家莊地鐵1號線北人站(建設(shè)大街和中山路交叉口)為例,在交通量調(diào)查的基礎(chǔ)上,對北人站交叉口交通情況用vissim仿真軟件進(jìn)行仿真,針對原方案的缺點對現(xiàn)有交通導(dǎo)行方案進(jìn)行優(yōu)化。交通方案優(yōu)化后,再用vissim仿真軟件進(jìn)行仿真,以平均排隊長度和交叉口延誤為參數(shù),以信號控制交叉口服務(wù)水平評價指標(biāo)為標(biāo)準(zhǔn),查看優(yōu)化方案仿真結(jié)果是否滿足信號控制交叉口服務(wù)水平評價指標(biāo)的要求;若滿足交叉口服務(wù)水平評價指標(biāo)的要求,則此方案即為優(yōu)化方案,若不滿足交叉口服務(wù)水平評價指標(biāo)的要求,則繼續(xù)尋找不足和缺點,繼續(xù)優(yōu)化,直到滿足交叉口服務(wù)水平評價指標(biāo)為止。文章為將來vissim在方案優(yōu)化中的應(yīng)用提供必要的參考。

陜西省榆林市榆陽區(qū)自2019年起全面推進(jìn)老舊小區(qū)改造，已成功改造209個小區(qū)，投資11.57億元。改造包括設(shè)施更新、環(huán)境改善、電梯加裝等，顯著提升居民生活品質(zhì)。政府主導(dǎo)、部門協(xié)作、街辦負(fù)責(zé)、居民參與，形成全方位工作體系，確保改造高效推進(jìn)。資金保障、規(guī)劃設(shè)計與群眾工作相結(jié)合，實現(xiàn)民生改善目標(biāo)。

陜西省榆林市榆陽區(qū)自2019年起全面推進(jìn)老舊小區(qū)改造，已成功改造209個小區(qū)，投資11.57億元。改造包括設(shè)施更新、環(huán)境改善、電梯加裝等，顯著提升居民生活品質(zhì)。政府主導(dǎo)、部門協(xié)作、街辦負(fù)責(zé)、居民參與，形成全方位工作體系，確保改造高效推進(jìn)。資金保障、規(guī)劃設(shè)計與群眾工作相結(jié)合，實現(xiàn)民生改善目標(biāo)。

陜西省榆林市榆陽區(qū)通過構(gòu)建全方位工作體系，大力推進(jìn)老舊小區(qū)改造項目。自2019年起，該區(qū)已成功完成209個老舊小區(qū)的改造，總投資達(dá)11.57億元。此過程中，政府主導(dǎo)、部門主抓、街辦主責(zé)、居民參與的工作模式得到了充分體現(xiàn)，不僅改善了居住環(huán)境，還增強了社區(qū)的安全性與便利性。

利用離子土壤固化劑加固武漢市漢陽區(qū)紅粘土,紅粘土首先通過不同配比iss水溶液的處理,然后進(jìn)行阿太堡試驗、擊實試驗、剪切試驗。試驗結(jié)果表明:紅粘土在加入iss后,塑性指數(shù)降低,最大干密度變大,粘聚力提高;此外,在最佳含水量下,密度對固化土抗剪強度參數(shù)的影響具有一定的規(guī)律性,其抗剪強度參數(shù)與壓實度(密度)呈很好的線性關(guān)系,具體表現(xiàn)為粘聚力隨密度的增加而增加,內(nèi)摩擦角隨密度的增大而減小。

JISS2093-1993