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用超聲波輔助乙醇溶液浸提法和索氏提取法提取新疆地方植物藥材紫穗槐中黃酮化合物并進(jìn)行含量測定。以蘆丁為對照品,NaNO2-Al(NO3)3-NaOH體系為顯色劑,利用分光光度法在510nm處測定提取物中的總黃酮的含量。校準(zhǔn)曲線為A=11.825C-0.0139,r=0.9992。超聲提取法所得總黃酮的含量以蘆丁計算為2.3562%,索氏提取法所得總黃酮的含量以蘆丁計算為2.6375%,平均回收率分別為102.16%和96.53%。索氏提取法的提取優(yōu)于超聲波輔助乙醇浸提法,該法簡單、準(zhǔn)確,可用于新疆紫穗槐果實(shí)總黃酮的測定。
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構(gòu)建了兩種能產(chǎn)生紫穗槐-4,11-二烯的釀酒酵母工程菌,其中附加體型工程菌W303-1B[pYeDP60/G/ADS]含有表達(dá)載體pYeDP60/G/ADS。整合體型工程菌W303-1B[rDNA:ADS]是將ADS基因的表達(dá)盒序列通過同源重組的方式整合到釀酒酵母W303-1B基因組中。GC-MS檢測發(fā)酵產(chǎn)物,結(jié)果表明這兩種工程菌均能產(chǎn)生紫穗槐-4,11-二烯,但附加體型工程菌產(chǎn)生的紫穗槐-4,11-二烯的產(chǎn)量要高于整合體型工程菌的產(chǎn)量。Southern雜交檢測表明,ADS基因以單拷貝的形式整合到W303-1B基因組中,低于附加體型工程酵母中的ADS基因拷貝數(shù)。這些結(jié)果表明,ADS基因的拷貝數(shù)與酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的產(chǎn)量呈正相關(guān)。
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