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[目的]基于體外血腦屏障(BBB)環(huán)境,觀察高膽固醇環(huán)境下PC12細(xì)胞膽固醇的代謝情況及銀杏內(nèi)酯A、B對其的影響。[方法]利用Transwell裝置共培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞建立體外BBB,并與PCI2細(xì)胞共培養(yǎng)。在Transwell內(nèi)皮細(xì)胞側(cè)添加40μmol/L膽固醇,并分別給予30μmol/L銀杏內(nèi)酯A和25μmol/L銀杏內(nèi)酯B進(jìn)行干預(yù)。干預(yù)結(jié)束后,采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)技術(shù),檢測膽固醇代謝關(guān)鍵酶低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白-1(LRP-1)、膽固醇?;D(zhuǎn)移酶(ACAT)、ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運子A1(ABCA1)及膽固醇24S-羥化酶基因(CYP46)在mRNA水平的表達(dá)。[結(jié)果]高膽固醇環(huán)境下,LRP-1表達(dá)下調(diào)(P〈0.01),ACAT及ABCA1表達(dá)上調(diào)(P〈0.05),CYP46的表達(dá)有上調(diào)趨勢;藥物干預(yù)后,除LRP-1有不同程度的升高(P〈0.05),其余各指標(biāo)均無明顯變化。[結(jié)論]GKA、B對高膽固醇環(huán)境下PCI2細(xì)胞膽固醇代謝關(guān)鍵酶LRP-1的表達(dá)有一定影響。
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目的運用RP-HPLC法測定哈蟆油中膽固醇棕櫚酸酯的含量。方法使用Agilent zorbax-C18色譜柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流動相∶甲醇-水(79∶21);柱溫:30℃;體積流速:1.5 mL/min;檢測波長:210nm;進(jìn)樣量均為10μL。結(jié)果哈蟆油中膽固醇棕櫚酸酯進(jìn)樣量在0.188 4~0.502 4μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,平均回收率為100.61%,RSD值為1.01%,且重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性均良好。結(jié)論此方法可以通過RP-HPLC法快速、穩(wěn)定、精密的測定哈蟆油中膽固醇棕櫚酸酯的含量,減少以往利用正相色譜的不便。