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建立高效液相色譜法測定廣玉蘭中小白菊內(nèi)酯含量的方法.采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色譜柱,以甲醇(A)―水(B)為流動相,梯度洗脫(0～10 min,10%→48%A;10～20 min,48%→80%A),流速1.0 mL/min,柱溫30℃,檢測波長210 nm.結(jié)果表明,小白菊內(nèi)酯的線性范圍為0.188～2.820μg(r=0.999 9),平均回收率(n=9)為99.3%.證實該方法簡便、準確、重復(fù)性好,可用于廣玉蘭中小白菊內(nèi)酯的含量測定.
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本文建立了適合中國菊花種質(zhì)資源長期保存的玻璃化超低溫保存技術(shù)體系。在4℃下,把1~2mm的菊花莖尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)2~3d,用預(yù)處理液在25℃下處理30min,再用玻璃化試劑PVS2在冰浴條件下處理15min,換新鮮的PVS2試劑并迅速投入液氮。液氮保存24h后,40℃水浴解凍2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液體培養(yǎng)基洗滌20min,濾紙吸干后接種到恢復(fù)培養(yǎng)基中,在25℃條件下弱光培養(yǎng)1~3d轉(zhuǎn)入正常光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng),2周后成活率可達86%以上,成活的莖尖均可再生。
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