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構(gòu)建了用于微流控細(xì)胞分析芯片的發(fā)光二極管(LED)誘導(dǎo)透射式熒光檢測微系統(tǒng),以克服現(xiàn)有熒光檢測系統(tǒng)體積大、能耗高,以及激發(fā)光光路、檢測區(qū)域和熒光收集光路間光學(xué)耦合效率低等問題。該系統(tǒng)的激發(fā)光光路和熒光收集光路互成135°,LED發(fā)出的激發(fā)光經(jīng)透鏡聚焦和激發(fā)光濾色片濾光后,經(jīng)直徑為200μm的小孔光闌限束,然后投射到微流控芯片通道末端的檢測區(qū)域;產(chǎn)生的熒光及雜散光經(jīng)加工后置于微流控芯片底部的發(fā)射光高通干涉濾色薄膜后,被光電倍增管收集。以HepG2肝癌細(xì)胞為測試樣本對該熒光檢測微系統(tǒng)的有效性進(jìn)行了評測,結(jié)果顯示:當(dāng)LED工作電流為200mA,PMT控制電壓為3.5V時(shí),可產(chǎn)生與背景噪聲明顯區(qū)分的峰值信號(hào);用250s觀測時(shí)間得到了8個(gè)平均峰高為0.7V的峰值信號(hào),與熒光顯微鏡觀察結(jié)果一致,實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞的在線計(jì)數(shù)檢測功能。提出的系統(tǒng)為新型微全細(xì)胞分析提供了一種新的技術(shù)途徑。
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有別于傳統(tǒng)的微流控芯片壓塑成型方法,本文提出注塑成型加工塑料微流控芯片的新工藝.采用UV-LIGA技術(shù)制作成型微通道的型芯,設(shè)計(jì)制造了微流控芯片注塑模具.充模試驗(yàn)表明,如何使微通道復(fù)制完全是微流控芯片注塑成型的主要技術(shù)難點(diǎn).模擬與理論分析表明,熔體在微通道處出現(xiàn)滯流現(xiàn)象是復(fù)制不完全的主要原因;搭建了可視化裝置對此加以試驗(yàn)驗(yàn)證.利用正交試驗(yàn)方法進(jìn)行充模試驗(yàn),研究各工藝參數(shù)對微通道復(fù)制度的影響.試驗(yàn)表明模具溫度對提高微通道復(fù)制度起決定性作用;注射速度和熔體溫度是次要因素,而注射壓力相對其他因素影響力較差,但必須保持在一個(gè)較高的水平.依此形成塑料微流控芯片的注塑成型工藝,對于寬80μm、深50μm截面的微通道而言,可使微通道復(fù)制度由70%提高到90%,滿足使用要求.
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