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以N-糖基化提高畢赤酵母重組表達(dá)β-葡萄糖醛酸苷酶（PGUS-P）的熱穩(wěn)定性為目的,在PGUS-P模擬結(jié)構(gòu)分析的基礎(chǔ)上,半理性方法設(shè)計(jì)并通過(guò)定點(diǎn)突變引入具有EAS（enhanced aromatic sequence）序列特征的新N-糖基化位點(diǎn),經(jīng)畢赤酵母重組表達(dá)后,獲得了3個(gè)新糖基化的突變酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259。反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分析表明,與原始PGUS-P相比,突變酶PGUS-P-26、PGUS-P-35和PGUS-P-259催化甘草酸水解的Km變小,Kcat/Km增加,表明其對(duì)底物甘草酸的親和力和催化效率均得到提高。熱穩(wěn)定性分析表明,PGUS-P-35和PGUS-P-259的熱穩(wěn)定性得到改善,在65℃下保溫90 min,其熱穩(wěn)定性相對(duì)PGUS-P分別提高了13%和11%。研究表明在蛋白質(zhì)的合適位點(diǎn)引入糖基修飾對(duì)提高蛋白的熱穩(wěn)定性具有促進(jìn)作用。
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在氧氣輔助下,硝酸選擇性氧化乙二醛制備了乙醛酸。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,通過(guò)高效液相色譜法,考察了通氧速率、保溫反應(yīng)溫度、硝酸用量等因素對(duì)乙二醛轉(zhuǎn)化率和乙醛酸收率的影響。研究結(jié)果表明:制備乙醛酸的最佳反應(yīng)條件為通氧速率50 m L/min,保溫反應(yīng)溫度60℃,硝酸與乙二醛物質(zhì)的量比0. 59。在此條件下,乙二醛轉(zhuǎn)化率為99. 00%,乙醛酸收率為84. 00%。與傳統(tǒng)的硝酸氧化生產(chǎn)工藝相比,硝酸物質(zhì)的量降低近10%,乙醛酸收率提高了5%以上。
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