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生物大分子的液_固色譜純化過程中固相載體會產(chǎn)生產(chǎn)物吸附、變性等不良影響。高速逆流色譜無需固相載體 ,且具有高分便率和高回收率的優(yōu)點 ,其中有機相 水相體系在分離天然產(chǎn)物中應用廣泛 ,而應用雙水相體系分離生物大分子尚處于研究階段。雙水相高速逆流色譜體系的建立與儀器設(shè)備及操作工藝條件密切相關(guān) ,因此利用多分離柱高速逆流色譜儀 ,研究了PEG10 0 0_無機鹽雙水相體系對標準蛋白質(zhì)混合物以及卵白蛋白的分離。pH值和PEG濃度對不同種類蛋白質(zhì)的分配系數(shù)影響不同 ,實驗發(fā)現(xiàn)在pH9 2的 15 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,細胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的分配系數(shù)差異較大 ,且分布合理 ,因而采用該體系在 0 8mL min流速 ,85 0r min轉(zhuǎn)速的條件下 ,成功分離了細胞色素C、溶菌酶和肌紅蛋白的混合物。實驗也發(fā)現(xiàn)在pH9 2的 16 0 % (W W)PEG10 0 0 17 0 % (W W)磷酸鉀鹽體系中 ,雞蛋清樣品中的主要蛋白質(zhì)成分 :卵轉(zhuǎn)鐵蛋白、卵白蛋白和溶菌酶的分配系數(shù)差異最大 ,因而采用該體系在 1 8mL min流速、85 0r min轉(zhuǎn)速的條件下 ,2 0 0min內(nèi)從雞蛋清樣品中成功分離卵白蛋白 ,其電泳純度為 10 0 % ,收率為 95 %。
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