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實(shí)驗(yàn) 7 聚丙烯酰胺凝膠電泳 原理 一 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ polyacrylamide gel electrophoresis, 簡(jiǎn)稱 PAGE），由稱盤狀電泳。 這種電泳是在區(qū)帶電泳的基礎(chǔ)上， 以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠作為支持物， 采用電泳 基質(zhì)的不連續(xù)體系（即凝膠層的不連續(xù)性、緩沖液離子成分的不連續(xù)性、 pH 的不連續(xù)性及 電位梯度的不連續(xù)性） ，使樣品在不連續(xù)的兩相間積聚濃縮成很薄的起始區(qū)帶（厚度為 10-2cm），然后再進(jìn)行電泳分離。 圓盤電泳名稱來源即由于此法的原理是依靠基質(zhì)的不連續(xù)性（ discontinuity ），湊巧在垂 直柱形凝膠上分散出的區(qū)帶也很象圓盤狀（ discoid shape），取“不連續(xù)性”和“圓盤狀”的 英文字頭“ disc”。因此英文名稱為“ disc electrophoresis”，中文直譯為盤狀電泳。 儀器裝置：如 圖 A 所示，上下兩個(gè)
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背景:實(shí)驗(yàn)表明,軟骨細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),經(jīng)常發(fā)生表型的丟失。但形成軟骨細(xì)胞團(tuán)塊時(shí)可以維持軟骨細(xì)胞表型,由此人們探討無支架結(jié)構(gòu)培養(yǎng)組織工程軟骨的技術(shù)。目的:擬建立軟骨細(xì)胞聚集培養(yǎng)體系,觀察在瓊脂糖表面培養(yǎng)軟骨細(xì)胞,無支架條件下構(gòu)建組織工程軟骨的特點(diǎn)。設(shè)計(jì)、時(shí)間及地點(diǎn):單一樣本觀察,于2006-10/2007-04在解放軍南京軍區(qū)總醫(yī)院骨科研究所完成。材料:SPF級(jí)新西蘭白兔4只,2周齡,雌雄不限。方法:分離、提取兔關(guān)節(jié)軟骨原代軟骨細(xì)胞,將低熔點(diǎn)瓊脂糖鋪于24孔培養(yǎng)板表面,按每孔2.5×105接種提取的兔原代軟骨細(xì)胞,在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),定期換液。主要觀察指標(biāo):取10d標(biāo)本行組織學(xué)、Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)檢測(cè)。結(jié)果:10d時(shí),軟骨細(xì)胞自聚集形成有一定形狀、大小的類軟骨組織,蘇木精-伊紅染色可見軟骨陷窩結(jié)構(gòu),甲苯胺藍(lán)染色見紫紅色異染,說明有蛋白聚糖的分泌。鈣染色未見鈣化,Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色有棕黃色顆粒,說明有Ⅱ型膠原分泌。結(jié)論:在瓊脂糖表面構(gòu)建組織工程軟骨的培養(yǎng)體系,瓊脂糖膜阻止軟骨細(xì)胞的黏附和伸展,從而保持軟骨細(xì)胞的圓形形態(tài);軟骨細(xì)胞在瓊脂糖表面直接接觸,加強(qiáng)了細(xì)胞之間的信息交流,有利于維持細(xì)胞的表型,維持軟骨細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的特征。
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