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篩選獲得草珊瑚與金粟蘭鑒別的特異位點(diǎn)并建立雙位點(diǎn)特異性PCR方法,用于鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片以及兩者的混雜品。采集不同產(chǎn)地的草珊瑚18份、金粟蘭6份,所有樣品提取總DNA,并對(duì)草珊瑚與金粟蘭干燥葉片進(jìn)行DNA提取。通過(guò)對(duì)其ITS片段進(jìn)行擴(kuò)增、測(cè)序,并搜索GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄的草珊瑚與金粟蘭的ITS序列,進(jìn)行同源比對(duì)后根據(jù)其變異位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性鑒別引物,構(gòu)建多重PCR體系,并優(yōu)化PCR條件,對(duì)草珊瑚與金粟蘭葉片進(jìn)行快速分子鑒定。構(gòu)建了多重PCR鑒別體系,只經(jīng)一個(gè)PCR反應(yīng),能擴(kuò)增出草珊瑚580 bp的特異性鑒別條帶及金粟蘭470 bp的特異性片段,可快速鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片,并可判斷相互是否混雜。使用雙位點(diǎn)特異性PCR技術(shù)可以有效快速鑒別草珊瑚與金粟蘭葉片,并可判斷相互是否混雜。
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